一 、產(chǎn)品詳情

 中文名稱：EGFRvIIIt 過表達A549單克隆細胞株

穩(wěn)轉(zhuǎn)基因：名稱：Homosapiensepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR),transcriptvariantEGFRvIII(序列：NM_001346941.2)EGFRvIIIt：EGFRvIII基因缺失胞內(nèi)段的突變體。

熒光蛋白：RFP

細胞株抗性PuroR（嘌呤霉素抗性）

1.親株細胞系：A-549細胞是于1972年由D.J.Giard等人通過從一名58歲白人男性的肺癌組織中進行外植體培養(yǎng)而建立的，角蛋白呈陽性。M.Lieber等人的研究表明，A549細胞可以利用胞苷二磷酸膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂。A-549細胞可用于癌癥、免疫腫瘤學(xué)和毒理學(xué)研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

2.過表達基因EGFRvIII：EGFRvIII是表皮生長因子受體EGFR的2～7 外顯子缺失形成的突變體。據(jù)報道，約5%的人肺鱗狀細胞癌(SCC)中存在EGFRvIII突變。EGFRvIII可能在人NSCLC腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。吉非替尼、厄洛替尼和HKI-272等藥物可抑制EGFRvIII轉(zhuǎn)化細胞的增殖和EGFRvIII陽性腫瘤的生長。

3.EGFRvIIIt：EGFRvIII全長基因缺失胞內(nèi)段的突變體。

4.A549-GFP-Puro+EGFRvIIIt 單克隆細胞株：該細胞株是由慢病毒Lenti-GFP-Puro+EGFR vIIIt轉(zhuǎn)導(dǎo)A549細胞經(jīng)嘌呤霉素篩選和無限稀釋法篩選構(gòu)建而成，該細胞能在體外穩(wěn)定過表達EGFRvIIIt和GFP。

5.細胞株質(zhì)檢：該單克隆細胞株在本庫通過支原體檢測，其親代細胞在本庫通過STR鑒定。

6.應(yīng)用領(lǐng)域：CART的免疫治療靶點。

二、細胞到貨處理

常溫到貨細胞:T25細胞培養(yǎng)瓶寄送活細胞（細胞處于培養(yǎng)液中）的處理方法

1.觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系。

2.用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。若因運輸問題，部分貼壁細胞從瓶壁脫落,先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2～4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3.靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)，如有異�，F(xiàn)象，例如污染，細胞狀態(tài)差等，請拍照留證并及時與技術(shù)支持聯(lián)系。

4.僅留適量細胞培養(yǎng)液（棄去多余），然后將細胞置于37°C，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

5.根據(jù)細胞習(xí)性及時換液、傳代、凍存細胞。

凍存管寄送活細胞（細胞處于全血清中）的處理方法：

1.用75%酒精徹底消毒細胞凍存管，然后在超凈工作臺將細胞懸液轉(zhuǎn)移至15mL無菌離心管，500g，室溫離心5min。

2.棄血清，用完全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀。

3.將細胞接種于合適的細胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，然后置于37°C，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.次日觀察細胞形態(tài)，如有異常現(xiàn)象，例如污染，細胞狀態(tài)差等，請拍照留證并及時與技術(shù)支持聯(lián)系。

5.根據(jù)細胞習(xí)性及時換液、傳代、凍存細胞。

干冰運輸細胞

1.將細胞從干冰中取出后立即置于37°C水浴，輕輕轉(zhuǎn)動凍存管，直至管內(nèi)細胞完全融化（最好在1～2min內(nèi)解凍）。

2.將凍存管轉(zhuǎn)移到超凈工作臺，用75%酒精徹底消毒凍存管。

三、細胞培養(yǎng)

1、細胞復(fù)蘇將含有1mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中快速搖晃至溶解，然后在超凈工作臺將細胞轉(zhuǎn)移至15mL無菌離心管，加入4mL培養(yǎng)基或無菌PBS混合均勻，室溫，500g，離心5min，棄上清液，用完全培養(yǎng)基重懸細胞，將細胞移入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿培養(yǎng)，第二天更換培養(yǎng)液并檢查細胞生長情況。

2、細胞傳代

貼壁細胞傳代：當細胞密度約80%時，可進行傳代培養(yǎng)：吸出原培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3mL0.25%胰酶進行消化（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。

鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）直接吸掉胰酶，加3~4mL完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)耐耆�培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

懸浮細胞傳代：當細胞密度約80%時，可進行傳代培養(yǎng)：直接將原培養(yǎng)液和細胞一起轉(zhuǎn)移至15mL或50mL無菌離心管，400～500g室溫離心5min，吸掉培養(yǎng)基，用新鮮完全培養(yǎng)基重懸細胞根據(jù)細胞生長特性，按合適比例傳代細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，將細胞置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3、細胞凍存收集細胞，500g，離心5min，棄上清液，加入無血清凍存液輕輕懸浮細胞，移入凍存管后進行凍存。

使用須知

1.本產(chǎn)品僅供購買方單方使用，不得向任何第三方贈送、轉(zhuǎn)讓或銷售；

2.本產(chǎn)品僅供實驗室和體外研究使用，不能用于任何臨床檢驗、診斷、治療，或任何非法用途；

3.收貨48h內(nèi)如若發(fā)現(xiàn)異常，請及時聯(lián)系售后，逾期視為收貨良好；

4.請嚴格按照本說明書操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務(wù)。