一 、產(chǎn)品詳情

 中文名稱(chēng)：GFP、CD19(h)過(guò)表達(dá)A549單克隆細(xì)胞株

穩(wěn)轉(zhuǎn)基因：名稱(chēng)：Homo sapiens CD19 molecule (CD19)序列：NM_001178098.2

熒光蛋白：RFP

細(xì)胞株抗性PuroR（嘌呤霉素抗性）

二、細(xì)胞到貨處理

常溫到貨細(xì)胞:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶寄送活細(xì)胞（細(xì)胞處于培養(yǎng)液中）的處理方法

1.觀(guān)察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系。

2.用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。若因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞從瓶壁脫落,先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2～4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)，如有異常現(xiàn)象，例如污染，細(xì)胞狀態(tài)差等，請(qǐng)拍照留證并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系。

4.僅留適量細(xì)胞培養(yǎng)液（棄去多余），然后將細(xì)胞置于37°C，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

5.根據(jù)細(xì)胞習(xí)性及時(shí)換液、傳代、凍存細(xì)胞。

凍存管寄送活細(xì)胞（細(xì)胞處于全血清中）的處理方法：

1.用75%酒精徹底消毒細(xì)胞凍存管，然后在超凈工作臺(tái)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15mL無(wú)菌離心管，500g，室溫離心5min。

2.棄血清，用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀。

3.將細(xì)胞接種于合適的細(xì)胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，然后置于37°C，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.次日觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)，如有異�，F(xiàn)象，例如污染，細(xì)胞狀態(tài)差等，請(qǐng)拍照留證并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系。

5.根據(jù)細(xì)胞習(xí)性及時(shí)換液、傳代、凍存細(xì)胞。

干冰運(yùn)輸細(xì)胞

1.將細(xì)胞從干冰中取出后立即置于37°C水浴，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍存管，直至管內(nèi)細(xì)胞完全融化（最好在1～2min內(nèi)解凍）。

2.將凍存管轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)，用75%酒精徹底消毒凍存管。

三、細(xì)胞培養(yǎng)

1、細(xì)胞復(fù)蘇將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中快速搖晃至溶解，然后在超凈工作臺(tái)將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15mL無(wú)菌離心管，加入4mL培養(yǎng)基或無(wú)菌PBS混合均勻，室溫，500g，離心5min，棄上清液，用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞移入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿培養(yǎng)，第二天更換培養(yǎng)液并檢查細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

2、細(xì)胞傳代

貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞密度約80%時(shí)，可進(jìn)行傳代培養(yǎng)：吸出原培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3mL0.25%胰酶進(jìn)行消化（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

鏡下觀(guān)察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見(jiàn)細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀(guān)察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）直接吸掉胰酶，加3~4mL完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)耐耆�培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

懸浮細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞密度約80%時(shí)，可進(jìn)行傳代培養(yǎng)：直接將原培養(yǎng)液和細(xì)胞一起轉(zhuǎn)移至15mL或50mL無(wú)菌離心管，400～500g室溫離心5min，吸掉培養(yǎng)基，用新鮮完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，按合適比例傳代細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，將細(xì)胞置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3、細(xì)胞凍存收集細(xì)胞，500g，離心5min，棄上清液，加入無(wú)血清凍存液輕輕懸浮細(xì)胞，移入凍存管后進(jìn)行凍存。

使用須知

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